2010.01.29 「豚の種別判別法」特許取得のお知らせ
このたび日本認証サービス株式会社は、黒豚識別遺伝子検査で採用しているDNAマイクロアレイ（DNAチップ）を用いた豚種別判別法について、国内特許を取得しましたことをお知らせ致します。
発明の名称：豚の種別の判別法
特許番号：特許第4363561号
特許権者：日本認証サービス株式会社
登録日：2009年8月28日
技術概要
黒豚（バークシャー種）の識別方法として、PCR-RFLP法を用いた毛色関連遺伝子の多型判別法が用いられることが多い。しかし、この方法は制限酵素処理を用いるため検査方法が煩雑であり、結果解析に電気泳動やUV写真撮影が必要であるなど、操作性に難点があった。
そこで弊社ではDNAマイクロアレイを用いて、豚毛色遺伝子のSNPs（一塩基多型）を相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションにより検出する方法を開発した。これにより、制限酵素処理や写真撮影、染色用の有害物質の使用が不要となり、操作性や安全性が向上した。さらに、ハイブリダイゼーションの使用によりPCR-RFLP法よりも多くのSNPs数を検出することが可能となり、豚遺伝子型の識別精度も向上した。発色の有無でSNPsの存在を判断することから、ヘテロ（異型）の判定も容易に行えるようになった。
分析手順
検体のサンプリング及び粉砕
↓
検体からDNAを抽出
↓
PCR（毛色に関連するMC1R遺伝子及びKIT遺伝子の一部領域を増幅）
↓
PCR反応液を混合、熱変性
↓
ハイブリダイゼーション及び発色
↓
発色パターンの解析及び結果判定
DNAマイクロアレイ法とPCR-RFLP法の比較
| DNAマイクロアレイ法 | PCR-RFLP法 | |
| 使用多型領域 （PCR増幅領域） |
毛色関連遺伝子（MC1R、KIT遺伝子の一部） | 毛色関連遺伝子（MC1R、KIT遺伝子の一部） |
| 検出SNPs数 | 14ヶ所（MC1R：5、KIT：9） | 7ヶ所（MC1R：3、KIT：4） |
| SNPs検出方法 | PCR増幅産物と相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションの有無 | PCR増幅産物の制限酵素（７種類）による切断の有無 |
| SNPs可視化方法 | ハイブリ後の発色操作、スキャン | 電気泳動、染色、写真撮影 |
| SNPs判定方法 | 発色キャプチャーの位置 | DNAバンドのパターン |
| 遺伝子型（アレルタイプ）決定方法 | SNPsの組み合わせ（PCR-RFLP法のものも使用可） | SNPsの組み合わせ |
| 検査所要時間 | 約8時間 | 約8時間 |
| 有害物質の使用 | 使用しない | EtBrを使用する |
| その他 | ヘテロ（異型）の判定が容易 | 各検査機関で使用されている |
DNAマイクロアレイの発色反応パターンの一例
 黒豚（バークシャー種） |
 交雑豚（バークシャー種ではない） |
 （参考）ハンプシャー種 |
判別対応種
- ・バークシャー
- ・大ヨークシャー
- ・ランドレース
- ・デュロック
- ・ハンプシャー
- ・梅山豚（メイシャン）
今後も新たな分析技術の研究開発に取り組み、食品や環境分野での調査に活用して参ります。
分析に関するご質問等ございましたら、分析事業部までお問い合わせください。